Javascript şu anda tarayıcınızda devre dışı.Javascript devre dışı bırakıldığında, bu web sitesinin bazı işlevleri çalışmayacaktır.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Department of Science, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Katalonya, İspanya * Bu yazarların bu çalışma hakkında bazı görüşleri var Eşit katkı arka planı: Hyaluronik asit (HA), estetik amaçlı dermal dolgu maddelerinin üretiminde kullanılan doğal olarak oluşan bir polisakkarittir.İnsan dokularında birkaç günlük bir yarı ömre sahip olduğundan, HA bazlı dermal dolgu maddeleri vücuttaki ömrünü uzatmak için kimyasal olarak modifiye edilir.Ticari HA bazlı dolgu maddelerindeki en yaygın modifikasyon, HA zincirlerini çapraz bağlamak için bir çapraz bağlama maddesi olarak 1,4-bütandiol diglisidil eterin (BDDE) kullanılmasıdır.Kalıntı veya reaksiyona girmemiş BDDE, milyonda <2 kısım (ppm) düzeyinde toksik olmadığı kabul edilir;bu nedenle, hasta güvenliğini sağlamak için nihai dermal dolgudaki kalan BDDE miktarı ölçülmelidir.Malzemeler ve yöntemler: Bu çalışma, sıvı kromatografi ve kütle spektrometrisini (LC-MS) birleştirerek alkali koşullar altında BDDE ve HA arasındaki çapraz bağlanma reaksiyonunun bir yan ürününün saptanmasını ve karakterizasyonunu açıklar.Sonuçlar: Farklı analizlerden sonra, HA-BDDE hidrojeli dezenfekte etmek için kullanılan alkali koşulların ve yüksek sıcaklığın bu yeni yan ürün olan “propilen glikol benzeri” bileşiğin oluşumunu desteklediği bulundu.LC-MS analizi, yan ürünün BDDE ile aynı monoizotopik kütleye, farklı bir alıkonma süresine (tR) ve farklı bir UV absorbans (λ=200 nm) moduna sahip olduğunu doğruladı.BDDE'den farklı olarak, LC-MS analizinde aynı ölçüm koşulları altında bu yan ürünün 200 nm'de daha yüksek bir saptama oranına sahip olduğu gözlemlendi.Sonuç: Bu sonuçlar, bu yeni bileşiğin yapısında epoksit olmadığını göstermektedir.Tartışma, ticari amaçlar için HA-BDDE hidrojel (HA dermal dolgu) üretiminde bulunan bu yeni yan ürünün riskini değerlendirmek için açıktır.Anahtar Kelimeler: hyaluronik asit, HA dermal dolgu, çapraz bağlı hyaluronik asit, BDDE, LC-MS analizi, BDDE yan ürünü.
Hyaluronik asit (HA) bazlı dolgu maddeleri, kozmetik amaçlı kullanılan en yaygın ve popüler dermal dolgu maddeleridir.1 Bu dermal dolgu maddesi, genellikle >%95 su ve %0.5-3 HA'dan oluşan ve onlara jel benzeri bir yapı veren bir hidrojeldir.2 HA bir polisakkarittir ve omurgalıların hücre dışı matrisinin ana bileşenidir.Malzemelerden biri.(1,4)-glukuronik asit-β (1,3)-N-asetilglukozamin (GlcNAc) tekrarlayan disakkarit birimlerinden oluşur ve glikosidik bağlarla bağlanır.Bu disakkarit düzeni tüm organizmalarda aynıdır.Bazı protein bazlı dolgu maddeleriyle (kollajen gibi) karşılaştırıldığında, bu özellik HA'yı oldukça biyouyumlu bir molekül yapar.Bu dolgu maddeleri, hastanın bağışıklık sistemi tarafından tanınabilen amino asit dizisi özgüllüğü sergileyebilir.
Bir dermal dolgu maddesi olarak kullanıldığında, HA'nın ana sınırlaması, hiyalüronidaz adı verilen spesifik bir enzim ailesinin varlığından dolayı dokular içinde hızlı dönüşümüdür.Şimdiye kadar, HA yapısında dokularda HA'nın yarı ömrünü artırmak için çeşitli kimyasal modifikasyonlar tarif edilmiştir.3 Bu modifikasyonların çoğu, HA zincirlerini çapraz bağlayarak hiyalüronidazın polisakkarit polimerlerine erişimini azaltmaya çalışır.Bu nedenle, HA yapısı ile çapraz bağlama maddesi arasındaki köprülerin oluşumu ve moleküller arası kovalent bağlar nedeniyle, çapraz bağlı HA hidrojeli, doğal HA'dan daha fazla anti-enzim bozunma ürünü üretir.4-6
Şimdiye kadar çapraz bağlı HA üretmek için kullanılan kimyasal çapraz bağlama maddeleri arasında metakrilamit, 7 hidrazid, 8 karbodiimid, 9 divinil sülfon, 1,4-bütandiol diglisidil eter (BDDE) ve poli(etilen glikol) diglisidil eter yer alır.10 ,11 BDDE şu anda en yaygın olarak kullanılan çapraz bağlama maddesidir.Bu tür hidrojellerin onlarca yıldır güvenli olduğu kanıtlanmış olmasına rağmen, kullanılan çapraz bağlama ajanları sitotoksik olabilen ve bazı durumlarda mutajenik olabilen reaktif reaktiflerdir.12 Bu nedenle, nihai hidrojeldeki kalıntı içeriği yüksek olmalıdır.Artık konsantrasyon milyonda 2 parçadan (ppm) az olduğunda BDDE güvenli kabul edilir.4
Gaz kromatografisi, kütle spektrometrisi (MS) ile birleştirilmiş boyut dışlama kromatografisi, nükleer manyetik rezonans (NMR) floresan ölçüm yöntemleri ve HA hidrojellerinde düşük kalıntı BDDE konsantrasyonunu, çapraz bağlanma derecesini ve ikame konumunu tespit etmek için çeşitli yöntemler vardır. Diyot dizisi birleştirilmiş yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC).13-17 Bu çalışma, alkali koşullar altında BDDE ve HA'nın reaksiyonu ile üretilen nihai çapraz bağlı HA hidrojelindeki bir yan ürünün saptanmasını ve karakterizasyonunu açıklamaktadır.HPLC ve sıvı kromatografi-kütle spektrometrisi (LC-MS analizi).BDDE'nin bu yan ürününün toksisitesi bilinmediğinden, kalıntı miktarının nihai üründe genellikle BDDE üzerinde uygulanan yönteme benzer bir şekilde belirlenmesini öneririz.
HA'nın elde edilen sodyum tuzu (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japonya) ~1.368.000 Da (Laurent yöntemi) 18 moleküler ağırlığa ve 2.20 m3/kg içsel viskoziteye sahiptir.Çapraz bağlama reaksiyonu için BDDE (≥%95), Sigma-Aldrich Co.'dan (St. Louis, MO, ABD) satın alındı.pH 7.4'e sahip fosfat tamponlu salin, Sigma-Aldrich Company'den satın alındı.LC-MS analizinde kullanılan tüm çözücüler, asetonitril ve su, HPLC kalite kalitesinden satın alınmıştır.Formik asit (%98), reaktif sınıfı olarak satın alınır.
Tüm deneyler bir UPLC Acquity sistemi (Waters, Milford, MA, ABD) üzerinde yapıldı ve bir elektrosprey iyonizasyon kaynağı (AB SCIEX, Framingham, MA, ABD) ile donatılmış bir API 3000 üçlü dört kutuplu kütle spektrometresine bağlandı.
Çapraz bağlı HA hidrojellerinin sentezi, %1 alkali (sodyum hidroksit, NaOH) varlığında %10 (a/a) sodyum hiyalüronat (NaHA) çözeltisine 198 mg BDDE eklenerek başlatıldı.Reaksiyon karışımındaki nihai BDDE konsantrasyonu, 9.9 mg/mL (0.049 mM) olmuştur.Daha sonra reaksiyon karışımı iyice karıştırıldı ve homojenleştirildi ve 4 saat 45°C'de ilerlemesine izin verildi.19 Reaksiyonun pH'ı ~12'de tutulur.
Daha sonra reaksiyon karışımı suyla yıkandı ve nihai HA-BDDE hidrojeli süzüldü ve 10 ila 25 mg/mL HA konsantrasyonu ve 7.4'lük bir nihai pH elde etmek için PBS tamponu ile seyreltildi.Üretilen çapraz bağlı HA hidrojellerini sterilize etmek için tüm bu hidrojeller otoklavlanır (20 dakika 120°C).Saflaştırılmış BDDE-HA hidrojel, analize kadar 4°C'de saklanır.
Çapraz bağlı HA ürününde bulunan BDDE'yi analiz etmek için 240 mg'lık bir numune tartıldı ve merkez deliğe (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, ABD; hacim 0,5 mL) yerleştirildi ve oda sıcaklığında 10,000 rpm'de santrifüjlendi. 10 dakika.Toplam 20 uL aşağı çekme sıvısı toplandı ve analiz edildi.
BDDE standardını (Sigma-Aldrich Co) alkali koşullar altında (%1, %0,1 ve %0,01 NaOH) analiz etmek için, aşağıdaki koşullar karşılanıyorsa, sıvı numune 1:10, 1:100 veya en fazla 1:1,000,000 Gerekirse, analiz için MilliQ deiyonize su kullanın.
Çapraz bağlama reaksiyonunda kullanılan başlangıç malzemeleri için (HA %2, H2O, %1 NaOH ve 0.049 mM BDDE), bu malzemelerden hazırlanan her numuneden 1 mL aynı analiz koşulları kullanılarak analiz edilmiştir.
İyon haritasında görünen tepe noktalarının özgüllüğünü belirlemek için, 20 uL numuneye 10 uL 100 ppb BDDE standart solüsyonu (Sigma-Aldrich Co) ilave edildi.Bu durumda, her numunedeki standardın nihai konsantrasyonu 37 ppb'dir.
İlk olarak, 10 μL standart BDDE'yi (Sigma-Aldrich Co) 990 μL MilliQ su (yoğunluk 1,1 g/mL) ile seyrelterek 11.000 mg/L (11.000 ppm) konsantrasyona sahip bir BDDE stok solüsyonu hazırlayın.110 µg/L (110 ppb) BDDE solüsyonu bir ara standart seyreltme olarak hazırlamak için bu solüsyonu kullanın.Ardından, istenen 75, 50, 25, 10 ve 1 ppb konsantrasyonuna ulaşmak için ara seyrelticiyi birkaç kez seyrelterek standart eğriyi hazırlamak için ara BDDE standart seyrelticisini (110 ppb) kullanın.Şekil 1'de gösterildiği gibi, 1.1'den 110 ppb'ye kadar olan BDDE standart eğrisinin iyi bir doğrusallığa sahip olduğu bulunmuştur (R2>0.99).Standart eğri, dört bağımsız deneyde tekrarlandı.
Şekil 1 LC-MS analizi ile elde edilen ve iyi bir korelasyonun gözlendiği (R2>0.99) BDDE standart kalibrasyon eğrisi.
Kısaltmalar: BDDE, 1,4-bütandiol diglisidil eter;LC-MS, sıvı kromatografisi ve kütle spektrometrisi.
Çapraz bağlı HA'da bulunan BDDE standartlarını ve baz çözeltideki BDDE standartlarını belirlemek ve ölçmek için LC-MS analizi kullanılmıştır.
Kromatografik ayırma, bir LUNA 2.5 um C18(2)-HST kolonu (50x2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, ABD) üzerinde gerçekleştirildi ve analiz sırasında oda sıcaklığında (25°C) tutuldu.Mobil faz, %0,1 formik asit içeren asetonitril (çözücü A) ve sudan (çözücü B) oluşur.Mobil faz, gradyan elüsyonuyla ayrıştırılır.Gradyan aşağıdaki gibidir: 0 dakika, %2 A;1 dakika, %2 A;6 dakika, %98 A;7 dakika, %98 A;7.1 dakika, %2 A;10 dakika, %2 A. Çalışma süresi 10 dakikadır ve enjeksiyon hacmi 20 µL'dir.BDDE'nin alıkonma süresi yaklaşık 3.48 dakikadır (deneylere dayalı olarak 3.43 ila 4.14 dakika arasında değişmektedir).Mobil faz, LC-MS analizi için 0.25 mL/dk'lık bir akış hızında pompalandı.
BDDE analizi ve MS ile miktar tayini için, UPLC sistemi (Waters), bir elektrosprey iyonizasyon kaynağı ile donatılmış bir API 3000 üçlü dört kutuplu kütle spektrometresi (AB SCIEX) ile birleştirilir ve analiz, pozitif iyon modunda (ESI+) gerçekleştirilir.
BDDE üzerinde yapılan iyon fragman analizine göre en yüksek yoğunluğa sahip fragmanın 129.1 Da'ya karşılık gelen fragman olduğu belirlendi (Şekil 6).Bu nedenle, niceleme için çok iyonlu izleme modunda (MIM), BDDE'nin kütle dönüşümü (kütle-yük oranı [m/z]) 203.3/129.1 Da'dır.Ayrıca LC-MS analizi için tam tarama (FS) modunu ve ürün iyon taraması (PIS) modunu kullanır.
Yöntemin özgüllüğünü doğrulamak için boş bir numune (ilk mobil faz) analiz edildi.Kütle dönüşümü 203.3/129.1 Da olan boş numunede sinyal tespit edilmedi.Deneyin tekrarlanabilirliği ile ilgili olarak, 55 ppb'lik (kalibrasyon eğrisinin ortasında) 10 standart enjeksiyon analiz edildi, sonuçta artık standart sapma (RSD) <%5 (veriler gösterilmemiştir).
Artık BDDE içeriği, dört bağımsız deneye karşılık gelen sekiz farklı otoklavlanmış BDDE çapraz bağlı HA hidrojelinde ölçülmüştür.“Malzemeler ve Yöntemler” bölümünde açıklandığı gibi, miktar tayini, 203.3/129.1 Da'lık BDDE kütle geçişinde tespit edilen benzersiz zirveye karşılık gelen BDDE standart seyreltmesinin regresyon eğrisinin ortalama değeri ile değerlendirilir. 3,43 ila 4,14 dakika arası Beklemez.Şekil 2, 10 ppb BDDE referans standardının örnek bir kromatogramını göstermektedir.Tablo 1, sekiz farklı hidrojelin kalıntı BDDE içeriğini özetlemektedir.Değer aralığı 1 ila 2.46 ppb'dir.Bu nedenle numunedeki kalıntı BDDE konsantrasyonu insan kullanımı için kabul edilebilir (<2 ppm).
Şekil 2 10 ppb BDDE referans standardının (Sigma-Aldrich Co), MS (m/z) geçişinin 203.30/129.10 Da (pozitif MRM modunda) LC-MS analizi ile elde edilen iyon kromatogramı.
Kısaltmalar: BDDE, 1,4-bütandiol diglisidil eter;LC-MS, sıvı kromatografisi ve kütle spektrometrisi;MRM, çoklu reaksiyon izleme;MS, kütle;m/z, kütle-yük oranı.
Not: Örnek 1-8, otoklavlanmış BDDE çapraz bağlı HA hidrojelleridir.Hidrojelde kalan BDDE miktarı ve BDDE alıkonma süresinin zirvesi de rapor edilir.Son olarak, farklı alıkonma sürelerine sahip yeni zirvelerin varlığı da rapor edilmektedir.
Kısaltmalar: BDDE, 1,4-bütandiol diglisidil eter;HA, hyaluronik asit;MRM, çoklu reaksiyon izleme;tR, alıkoyma süresi;LC-MS, sıvı kromatografisi ve kütle spektrometrisi;RRT, bağıl tutma süresi.
Şaşırtıcı bir şekilde, LC-MS iyon kromatogramının analizi, analiz edilen tüm otoklavlanmış çapraz bağlı HA hidrojel numunelerine dayanarak, 2.73 ila 3.29 dakikalık daha kısa alıkonma süresinde fazladan bir pik olduğunu gösterdi.Örneğin, Şekil 3, yaklaşık 2.71 dakikalık farklı bir alıkonma süresinde ek bir tepenin göründüğü çapraz bağlı bir HA numunesinin iyon kromatogramını göstermektedir.Yeni gözlenen pik ile BDDE'den alınan pik arasında gözlenen bağıl alıkonma süresi (RRT) 0.79 olarak bulundu (Tablo 1).Yeni gözlemlenen pikin LC-MS analizinde kullanılan C18 kolonunda daha az tutulduğunu bildiğimiz için, yeni pik BDDE'den daha polar bir bileşiğe karşılık gelebilir.
Şekil 3 LC-MS ile elde edilen çapraz bağlı HA hidrojel numunesinin iyon kromatogramı (MRM kütle dönüşümü 203.3/129.0 Da).
Kısaltmalar: HA, hyaluronik asit;LC-MS, sıvı kromatografisi ve kütle spektrometrisi;MRM, çoklu reaksiyon izleme;RRT, bağıl tutma süresi;tR, alıkoyma süresi.
Gözlenen yeni piklerin, kullanılan hammaddelerde orijinal olarak bulunan kirletici maddeler olma olasılığını ortadan kaldırmak için, bu hammaddeler de aynı LC-MS analiz yöntemi kullanılarak analiz edildi.Analiz edilen başlangıç malzemeleri arasında su, su içinde %2 NaHA, su içinde %1 NaOH ve çapraz bağlama reaksiyonunda kullanılan aynı konsantrasyonda BDDE yer alır.Kullanılan başlangıç materyalinin iyon kromatogramı herhangi bir bileşik veya tepe göstermedi ve alıkonma süresi gözlemlenen yeni tepe noktasına karşılık geliyor.Bu gerçek, yalnızca başlangıç materyalinin analiz prosedürüne müdahale edebilecek herhangi bir bileşik veya madde içerebileceği değil, diğer laboratuvar ürünleriyle olası bir çapraz kontaminasyon belirtisi olmadığı fikrini ortadan kaldırır.BDDE'nin LC-MS analizinden sonra elde edilen konsantrasyon değerleri ve yeni pikler Tablo 2'de (örnek 1-4) ve iyon kromatogramı Şekil 4'te gösterilmektedir.
Not: Örnek 1-4, otoklavlanmış BDDE çapraz bağlı HA hidrojellerini üretmek için kullanılan ham maddelere karşılık gelir.Bu numuneler otoklavlanmamıştır.
Kısaltmalar: BDDE, 1,4-bütandiol diglisidil eter;HA, hyaluronik asit;LC-MS, sıvı kromatografisi ve kütle spektrometrisi;MRM, çoklu reaksiyon izleme.
Şekil 4, HA ve BDDE'nin çapraz bağlama reaksiyonunda kullanılan bir hammadde numunesinin LC-MS kromatogramına karşılık gelir.
Not: Bunların tümü, çapraz bağlama reaksiyonunu gerçekleştirmek için kullanılan aynı konsantrasyon ve oranda ölçülür.Kromatogram ile analiz edilen ham maddeler için sayılar şunlara karşılık gelir: (1) su, (2) %2 HA sulu solüsyon, (3) %1 NaOH sulu solüsyon.LC-MS analizi, 203.30/129.10 Da (pozitif MRM modunda) kütle dönüşümü için gerçekleştirilir.
Kısaltmalar: BDDE, 1,4-bütandiol diglisidil eter;HA, hyaluronik asit;LC-MS, sıvı kromatografisi ve kütle spektrometrisi;MRM, çoklu reaksiyon izleme.
Yeni zirvelerin oluşumuna yol açan koşullar araştırıldı.Çapraz bağlı HA hidrojelini üretmek için kullanılan reaksiyon koşullarının, BDDE çapraz bağlama maddesinin reaktivitesini nasıl etkilediğini ve yeni piklerin (olası yan ürünler) oluşumuna yol açtığını incelemek için farklı ölçümler yapıldı.Bu belirlemelerde, sulu bir ortamda farklı konsantrasyonlarda NaOH (%0, %1, %0,1 ve %0.01) ile işleme tabi tutulmuş, ardından otoklavlamalı veya otoklavsız son BDDE çapraz bağlayıcısını inceledik ve analiz ettik.Aynı koşulları simüle etmek için bakteri prosedürü, çapraz bağlı HA hidrojeli üretmek için kullanılan yöntemle aynıdır.“Malzemeler ve Yöntemler” bölümünde açıklandığı gibi, numunenin kütle geçişi LC-MS ile 203.30/129.10 Da'ya analiz edildi.BDDE ve yeni pikin konsantrasyonu hesaplanır ve sonuçlar Tablo 3'te gösterilir. Otoklavlanmayan numunelerde, solüsyonda NaOH bulunmasına bakılmaksızın yeni pik tespit edilmemiştir (numuneler 1-4, Tablo 3).Otoklavlanmış numuneler için, yeni pikler yalnızca çözeltide NaOH varlığında tespit edilir ve pikin oluşumu, çözeltideki NaOH konsantrasyonuna bağlı gibi görünmektedir (örnekler 5-8, Tablo 3) (RRT = 0.79).Şekil 5, NAOH varlığında veya yokluğunda iki otoklavlanmış numuneyi gösteren bir iyon kromatogramı örneğini göstermektedir.
Kısaltmalar: BDDE, 1,4-bütandiol diglisidil eter;LC-MS, sıvı kromatografisi ve kütle spektrometrisi;MRM, çoklu reaksiyon izleme.
Not: Üst kromatogram: Numune, %0.1 NaOH sulu solüsyonu ile işleme tabi tutuldu ve otoklavlandı (20 dakika boyunca 120°C).Alt kromatogram: Numune NaOH ile işleme tabi tutulmadı, ancak aynı koşullar altında otoklavlandı.203.30/129.10 Da (pozitif MRM modunda) kütle dönüşümü LC-MS ile analiz edildi.
Kısaltmalar: BDDE, 1,4-bütandiol diglisidil eter;LC-MS, sıvı kromatografisi ve kütle spektrometrisi;MRM, çoklu reaksiyon izleme.
NaOH içeren veya içermeyen tüm otoklavlanmış numunelerde BDDE konsantrasyonu büyük ölçüde azaldı (16.6 kata kadar) (numuneler 5-8, Tablo 2).BDDE konsantrasyonundaki azalma, yüksek sıcaklıklarda suyun bir 1,2-diol bileşiği oluşturmak üzere BDDE'nin epoksit halkasını açmak için bir baz (nükleofil) görevi görmesi nedeniyle olabilir.Bu bileşiğin monoizotopik kalitesi BDDE'ninkinden farklıdır ve bu nedenle etkilenmeyecektir.LC-MS, 203.30/129.10 Da'lık bir kütle kayması saptadı.
Son olarak, bu deneyler, yeni piklerin oluşumunun BDDE, NAOH ve otoklavlama işleminin varlığına bağlı olduğunu, ancak HA ile hiçbir ilgisi olmadığını göstermektedir.
Yaklaşık 2.71 dakikalık bir tutma süresinde bulunan yeni zirve daha sonra LC-MS ile karakterize edildi.Bu amaçla BDDE (9.9 mg/mL) %1'lik NaOH sulu solüsyonunda inkübe edildi ve otoklavlandı.Tablo 4'te, yeni pikin özellikleri bilinen BDDE referans piki ile karşılaştırılır (tutma süresi yaklaşık 3.47 dakika).İki tepe noktasının iyon parçalanma analizine dayanarak, 2.72 dakikalık bir alıkonma süresine sahip tepe noktasının, BDDE zirvesi ile aynı parçaları gösterdiği ancak farklı yoğunluklarda olduğu sonucuna varılabilir (Şekil 6).2.72 dakikalık alıkonma süresine (PIS) karşılık gelen pik için, 147 Da'lık bir kütlede parçalanmadan sonra daha yoğun bir pik gözlemlendi.Bu belirlemede kullanılan BDDE konsantrasyonunda (9.9 mg/mL) kromatografik ayırmadan sonra ultraviyole spektrumunda farklı absorbans modları (UV, λ=200 nm) de gözlenmiştir (Şekil 7).2.71 dakikalık bir alıkonma süresine sahip pik, 200 nm'de hala görülebilirken, BDDE piki, aynı koşullar altında kromatogramda gözlenemez.
Tablo 4 Yaklaşık 2.71 dakikalık bir alıkonma süresi olan yeni pikin ve 3.47 dakikalık bir alıkonma süresi olan BDDE pikinin karakterizasyon sonuçları
Not: Bu sonuçları elde etmek için iki tepe üzerinde LC-MS ve HPLC analizleri (MRM ve PIS) gerçekleştirilmiştir.HPLC analizi için 200 nm dalga boyuna sahip UV tespiti kullanılır.
Kısaltmalar: BDDE, 1,4-bütandiol diglisidil eter;HPLC, yüksek performanslı sıvı kromatografisi;LC-MS, sıvı kromatografisi ve kütle spektrometrisi;MRM, çoklu reaksiyon izleme;m/z, kütle-yük oranı;PIS, ürün İyon tarama;ultraviyole ışık, ultraviyole ışık.
Not: Kütle parçaları, LC-MS analizi (PIS) ile elde edilir.Üst kromatogram: BDDE standart numune parçalarının kütle spektrumu.Alt kromatogram: Saptanan yeni tepe noktasının kütle spektrumu (BDDE tepe noktasıyla ilişkili RRT 0,79'dur).BDDE, %1 NaOH solüsyonunda işlendi ve otoklavlandı.
Kısaltmalar: BDDE, 1,4-bütandiol diglisidil eter;LC-MS, sıvı kromatografisi ve kütle spektrometrisi;MRM, çoklu reaksiyon izleme;PIS, ürün iyon taraması;RRT, bağıl tutma süresi.
Şekil 7 203.30 Da öncül iyonun iyon kromatogramı ve (A) 2.71 dakikalık bir alıkonma süresine sahip yeni zirve ve (B) 200 nm'de 3.46 dakikada BDDE referans standart zirvesinin UV tespiti.
Üretilen tüm çapraz bağlı HA hidrojellerinde, LC-MS nicelemesinden sonra kalan BDDE konsantrasyonunun <2 ppm olduğu gözlemlendi, ancak analizde yeni bir bilinmeyen tepe ortaya çıktı.Bu yeni tepe noktası, BDDE standart ürünüyle eşleşmiyor.BDDE standart ürünü de pozitif MRM modunda aynı kalite dönüşümüne (MRM dönüşümü 203.30/129.10 Da) tabi tutulmuştur.Genel olarak, hidrojellerde BDDE'yi saptamak için sınır testleri olarak kromatografi gibi diğer analitik yöntemler kullanılır, ancak maksimum saptama sınırı (LOD) 2 ppm'den biraz daha düşüktür.Öte yandan, şimdiye kadar NMR ve MS, çapraz bağlı HA ürünlerinin şeker birimi fragmanlarında HA'nın çapraz bağlanma derecesini ve/veya modifikasyonunu karakterize etmek için kullanılmıştır.Bu tekniklerin amacı, hiçbir zaman bu makalede açıkladığımız gibi düşük konsantrasyonlarda artık BDDE saptamasını ölçmek olmamıştır (LC-MS yöntemimizin LOD'si = 10 ppb).
Gönderim zamanı: Eylül-01-2021